什么是溶血性链球菌! 溶血性链球菌! _生活知识

溶血性链球菌！(什么是溶血性链球菌！)
链球菌在各种动物中普遍存在，其中大多数是宿主特异性的。不同的菌株感染不同种类的动物。链球菌可引起一系列疾病，包括脑膜炎、败血症、多发性浆膜炎、关节炎、心内膜炎和肺炎。在鼻炎和流产的病例中也分离到链球菌，表明它也与这两种疾病有关。链球菌感染的发病模式和严重程度因地区而异。链球菌有多种血清型，其中猪链球菌至少有34种血清型。它们的致病性和临床症状不同，同一血清型的致病性和临床症状在不同情况下会有不同的表现。有些血清型主要分离自健康猪，不致病。有的主要引起肺损伤；有些可以感染猪和其他动物。有些血清型，主要是2型，不仅能引起猪脑膜炎，偶尔也会引起人脑膜炎。
1病因特征
1.1形态学和染色
链球菌呈球形或椭圆形，直径0.6 ~ 1.0微米，呈链状排列。短的由4 ~ 8个细菌组成，老的由20 ~ 30个细菌组成。链的长度与细菌的种类和生长环境有关。在液体介质中容易形成长链，在固体介质中容易形成短链。因为链球菌可以产生降解酶，所以在正常情况下，链球菌的链不能无限延长。大多数菌株在血清肉汤中培养2 ~ 4小时，容易形成透明质酸胶囊。连续培养后，胶囊可被细菌自身产生的透明质酸酶分解而消失。这种细菌不形成孢子，没有鞭毛，很容易被普通的碱性染料染色。为革兰氏阳性(图2-4) ，经长期培养或中性粒细胞吞噬后转为革兰氏阴性。

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1.2文化特征
需氧或兼性厌氧菌对营养要求较高，在普通培养基上不能很好生长，只有补充血清、血液和葡萄糖才能生长。最适生长温度为37℃ ，可在20 ~ 42℃生长，最适酸碱度为7.4 ~ 7.6 。血清肉汤中易呈长链，管底呈絮状或颗粒状。血平板上形成灰色、半透明、表面光滑、边缘整齐、直径0.5 ~ 0.75 mm的小菌落，不同菌株有不同的溶血现象(图2-5) 。

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1.3生化反应
它分解葡萄糖，产酸不产气，对乳糖、甘露醇、水杨苷、山梨醇、棉子糖、海藻糖和七叶皂苷的分解能力因菌株不同而异。一般菊粉不分解，不被胆汁溶解，酶接触试验阴性。
1.4抗原结构
链球菌的抗原结构复杂，主要有三种类型:
(1)核蛋白抗原，或称P抗原，非特异性，各种链球菌相同，与葡萄球菌交叉。
(2)多糖抗原，或称C抗原，是一种群体特异性抗原，是细胞壁的多糖成分，可用稀盐酸提取。根据兰斯菲尔德的血清学分类，利用多糖抗原可以将链球菌分为多组。目前有A、B、C、D、E、F、G、H、K、L、M、N、O、P、Q、R、S、T、U19 9 9个血清群，每个血清群有多个血清型。根据细菌荚膜抗原的不同特点，猪链球菌可分为35个血清型，即1 ~ 34型和1/2型，同时具有1型和2型抗原。
(3)蛋白质抗原，或称表面抗原，具有类型特异性，位于多糖抗原的外层，可分为M、T、R和S4抗原成分，性质不同。致病性与M抗原有关， M抗原具有抗吞噬作用，使链球菌容易粘附上皮细胞。根据不同的M抗原， A群链球菌可分为60多个血清型。r、T、S抗原与致病性和毒力关系不大，但可用于链球菌分型。
1.5分类
链球菌在血液培养基上生长繁殖后，根据是否溶血和溶血特性，可分为三类。
1.5.1 α溶血性链球菌
菌落周围有一个宽度为1 ~ 2mm的草绿色溶血环，又称溶血性链球菌A ，多为条件致病菌。
1.5.2 β溶血性链球菌
菌落周围形成一个2 ~ 4 mm宽、界限分明、完全透明的无色溶血环，又称B型溶血性链球菌。这种细菌也被称为溶血性链球菌，它的致病性很高，经常引起人类和动物的许多疾病。
1.5.3 γ-链球菌
它不产生溶血素，菌落周围没有溶血环，也称为C或非溶血性链球菌。这种细菌是非致病性的，经常存在于牛奶和粪便中，偶尔会引起人类或动物感染。
1.6阻力
这种细菌的抗性一般不强，在60℃下30分钟后被杀死。对常用消毒剂敏感，可在干燥的灰尘中存活数月。B链球菌对青霉素、红霉素、氯霉素、四环素、磺胺敏感。β-内酰胺类药物是链球菌感染的首选药物。
2流行病学特征
链球菌在自然界中广泛分布。它存在于水、空气体、灰尘、粪便以及健康人和动物的口腔、鼻腔和咽喉中。它可以通过直接接触、/[k0/]气体飞沫或通过皮肤和粘膜伤口传播和感染。被污染的食物，如肉、蛋、奶及其制品也会感染人类。上呼吸道感染患者和人畜化脓性感染部位常成为食物污染源。
3危害
链球菌有很多种，而猪链球菌与人类关系密切。在猪链球菌的多种血清型中，猪链球菌2型是猪最重要的病原，致病性最强。链球菌的致病性与溶菌酶释放蛋白、细胞外蛋白因子、溶血素等毒力因子有关。
在中国， 2005年四川部分地区暴发的猪链球菌2型导致200多人感染， 38人死亡。在荷兰，屠宰场工人和农场饲养员的猪链球菌脑膜炎年发病率约为3/10万，是不在屠宰场工作的人的1500倍，屠夫的猪链球菌脑膜炎发病率为1.2/10万。在德国，屠夫、屠宰场工人和肉类加工厂工人是猪链球菌在鼻咽部定居的高危人群。在新西兰， 1980年后的研究表明， 9%的奶农、10%的肉检人员和21%的养猪户对猪链球菌血清型2呈阳性，表明部分人存在亚临床感染。
4检测方法
包括病原分离鉴定方法、分子生物学方法、免疫学方法ELISA等。
4.1分离和鉴定方法
4.1.1样品处理
【什么是溶血性链球菌! 溶血性链球菌!】取25g(或25mL)待测样品，加入225mL无菌生理盐水，制成混悬液。
4.1.2接种培养
吸取5mL悬液接种于50mL葡萄糖肉浸液肉汤中，或直接在血平板上画线(若待测样品污染严重，可同时接种5mL于Peak氏肉汤中) ， 36℃孵育24h ， 36℃孵育24h ，搅起带溶血圆形突起B的微小菌落，在血平板上分离纯化，观察培养特性、溶血情况、液固中革兰染色及形态，进行循环磷酸。
CAMP测试
在血琼脂平板上用金黄色葡萄球菌培养物画一条直线，再用链球菌培养物画一条直线，与金黄色葡萄球菌培养物的直线垂直，但不要触碰，它们之间的距离为3 ~ 5 mm ，链球菌分离物的直线之间的距离为10 ~ 20 mm ， 37℃孵育24小时后观察结果。两条线交界处箭头状溶血区为阳性。
4.1.4链激酶试验
吸收0.2毫升草酸钾血浆，加入0.8毫升灭菌生理盐水，混匀，然后加入0.5毫升36℃培养18 ~ 24小时的链球菌肉提取物肉汤和0.25毫升0.25%氯化钙，混匀， 36℃水浴10分钟，血浆混合物会自行凝固。观察血块再次完全溶解的时间，完全溶解为阳性， 24小时后未溶解为阴性。同时，肉提取物肉汤用作阴性对照，已知的链激酶阳性菌株用作阳性对照。
4.1.5杆菌肽敏感性试验
将典型菌落的菌液涂在血平板上，每张含0.04U的杆菌肽纸用无菌镊子放在平板上， 36℃培养18 ~ 24h 。如果有抑菌圈，就是阳性。使用已知的阳性菌株作为对照。
4.2分子生物学方法
挑取单个可疑菌落，接种于Luria-贝尔塔尼(LB)肉汤培养基中， 37℃摇匀过夜，将1.0mL菌悬液置于1.5mL离心管中，用冷冻离心机以12000转/分钟离心10分钟，弃去上清液，加入1.0mL灭菌双蒸水，旋入菌悬液，水浴以3000转/分钟煮沸10分钟。上游引物为5’-gtacagttgctagacgtatc-3’ ，下游引物为5’-ACGTTCGATTTCATCACGTT-3’ 。反应体系:10×buffer5μL ， TaqDNA聚合酶(5U/μL)1μL ，氯化镁溶液(25mol/L)3μL ， dNTP(2.5mol/L)4μL ，上游引物(10 μ mol/l) 1 μ l ，下游引物(10μmol/L)1μL ，反应条件:95℃预变性5min ， 94℃变性1min ， 59℃退火1min ， 72℃延伸45s ， 30分钟聚合酶链反应产物用1.5%琼脂糖在100伏下电泳，扩增长度为197bp的扩增产物对链球菌呈阳性。
4.3酶联免疫吸附试验
4.3.1涂层
用0.05mol/LpH9.0碳酸盐包被缓冲液，稀释抗体至蛋白质含量为1 ~ 10 μ g/ml 。将0.1毫升抗体在4℃下加入每个聚苯乙烯板的反应孔中过夜。第二天，将孔中3分钟的溶液丢弃，并用洗涤缓冲液洗涤3次，每次3分钟(以下称为洗涤) 。
4.3.2添加样品
向包被的反应孔中加入0.1毫升稀释的细菌溶液，并在37℃孵育1小时。然后冲洗(同时制作空白孔、阴性对照孔和阳性对照孔) 。
4.3.3添加酶标抗体
向每个反应孔中加入0.1毫升新稀释的酶标记抗体(滴定后稀释) 。37℃孵育0.5 ~ 1h ，洗涤。
4.3.4添加用于显色的底物溶液
向每个反应孔中加入0.1毫升临时制备的TMB底物溶液，并在37℃孵育10 ~ 30分钟。
4.3.5反应终止
向每个反应孔中加入0.05毫升2摩尔/升硫酸。
4.3.6结果判断
在白色背景上，肉眼可以直接观察到结果:反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极淡，根据颜色用“+”和“-”表示。同样可测量的OD值:在ELISA检测器上，在450纳米处，用空白色对照孔调零后测量每个孔的OD值，如果大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，则为阳性。