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紫杉醇主要存在于红豆杉的什么中( 二 )

睿知紫杉


目前文献报道从各种紫杉植物中提取紫杉醇的方法，均需经过繁冗的分离过程 。本实验采用了一种适合于以各种紫杉植物树叶或树枝做原料，通过极性梯度溶剂萃取的方法逐步脱除大量不相干杂质，得到合成紫杉醇的前体10-DABⅢ的方法，然后通过反相层析柱加成，即可获得抗癌活性成分紫杉醇； 材料与方法 1 材料与仪器
南方红豆杉Taxus mairei枝叶取自浙江宁海红豆杉种植基地，8年树龄 。10-DABⅢ对照品为Sigma公司产品，纯度98％；所用甲醇；乙醇、乙酸乙酯、乙酸丁酯、二氯甲烷、氯仿、正己烷、石油醚、乙腈等均为分析纯试剂 。JJ一1精密增力电动搅拌仪，江苏金坛市江南仪器厂；SENCO R一201旋转蒸发仪，上海申顺生物科技有限公司；玻璃硅胶柱为2cm×40cm，杭州常盛科教器具厂；UV一2802PC／PCS型分光光度计，UNICO上海仪器有限公司；Sigma一3K18低温离心机4℃，转速18000rmin；LabAlliance高效液相色谱仪美国SSI公司 。
2 实验方法
取南方红豆杉枝叶研磨成细粉，于燥保存 。称取100g红豆杉细粉，45℃烘干，石油醚预处理，5L甲醇冷浸，辅以搅拌，超声40min，反复2次 。浸渍液过滤，减压浓缩至100mL 。加入75 mL正己烷萃取分液，重复操作2～3次 。弃去正己烷层，萃余液旋干溶剂，制成浸膏 。加入氯仿与水的混合液1：1反复提取 。氯仿层减压浓缩至10～15mL上柱，用硅胶正相色谱柱分离 。分段收集洗脱液，紫外监测，收集有效段合并浓缩，在甲醇／水中重结晶 。3 分析测试方法
采用反相高效液相色谱RP―HPLC方法检测 。分析柱为Kromasil C18柱250mm×4.6 mm，5μm，流动相为乙腈-水30：70，流速为2.0 mLmin，每次进样体积为10μl，进样间隙用纯乙腈对柱子进行梯度冲洗 。紫杉醇最大吸收波长为227nm，检测器测定波长为232nm，温度30℃，相关数据计算均采用峰面积归一化法 。
结 果 1 预处理
由于红豆杉枝叶中含有大量蜡质、植物色素诸如叶绿素等低极性杂质，故在提取前应首先加入低极性溶剂如正己烷、石油醚浸泡脱脂，以除去大量存在的此类非极性杂质，简化后续操作 。该法可除去红豆杉枝叶中多达72％的极性比10-DABⅢ小且可溶于正己烷的杂质 。
【紫杉醇主要存在于红豆杉的什么中】2 有机溶剂粗提
目前用于紫杉烷类物质提取的最普通的初级萃取剂是乙醇甲醇和水，Xu等采用的是体积比95：5的甲醇和二氯甲烷的混合物，萃取时间为35~60min；而Hoke等和Powell等都选择的是纯甲醇，所需萃取时间为16～48h 。将南方红豆杉枝叶的细粉在45℃烘干，甲醇浸渍，搅拌过夜 。在搅拌的不同时间内其提取出的10-DABⅢ的含量 。可以看出，有机溶剂粗提时的浸渍搅拌时间应以12h左右为佳 。
3 初级萃取
将甲醇萃取液减压旋蒸至干，得浸膏 。用10倍体积以甲醇浸膏的量为基准的纯净水分几次全部溶解，因目标产物10-DABⅢ不溶于水，故而形成悬浮液 。用石油醚或正己烷反复萃取，因目标产物不溶于非极性溶剂正己烷中，经此可基本去除极性比10-DABⅢ小的杂质 。
在大多数情况下，还须对甲醇粗提物进行萃取操作 。一般是在初级萃取物中加入二氯甲烷和水的混合物，即液液萃取，该方法可有效除去萃取液中50％质量比的非紫杉烷类物质 。但实验发现要严格掌握好甲醇、二氯甲烷、水三者的比例，否则会出现提取不彻底，在两相中均含有目标产物，且还会有乳化现象发生 。
本实验中是采用加入氯仿／水的混合溶液 1：1将浸膏完全溶解然后进行液液萃取 。操作中 应按照每次向水相中加入4～5倍体积的氯仿来进行，并轻轻振荡分页漏斗，以避免出现严重的乳化现象 。因实验中发现二氯甲烷在用碱液和水洗时不可避免严重乳化，造成目标产物损失难以回收，而氯仿因与目标产物极性相匹，对10-DABⅢ的溶解性更高，与水相分层界面明显，可在更大程度上实现目标产物10-DABⅢ与极性水溶性杂质的分离 。

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