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微生物菌种保存方法汇总 菌种保藏方法( 二 )

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(1)选择适合冷冻干燥的菌龄细胞 。
②选择合适的培养基，因为随着培养基成分的变化，某些微生物的抗冻性往往表现出很大的差异 。
③选择合适的菌种浓度，菌种浓度越高，成活率越高，保质期越长 。
④最好不要添加电解质(如盐等) 。)注入细菌溶液中 。
⑤菌液中可加入甘油等保护剂，防止冷冻过程中大量细菌死亡的现象 。同样，也可以加入各种保护效果好的溶剂，如糖、去纤维血、脱脂奶等，但对于某些微生物，不加保护剂效果更好 。
⑥原则上应尽快进行冷冻处理，但加入保护剂后，可静置一段时间再进行处理 。
⑦就动物细胞而言，应在-20℃范围内，以1℃/min左右的速度缓慢降温，然后必须尽快降至保存温度；对于绝大多数微生物来说，这是没有必要的 。例如，结构复杂的原生动物可以在-35℃范围内缓慢冷却，而噬菌体必须通过上述两阶段方法冷冻 。
⑧如果长时间存放，存放温度越低越好 。
⑨取冷冻菌种时，应采取快速融化措施 ， 即在35 ~ 40℃的温水中轻轻摇晃 ， 使其快速融化 。就厌氧菌而言，应选择静置和融化的措施 。冷冻的细菌融化时，要尽量避免再次冷冻，否则细菌的存活率会明显下降 。
常用的冷冻保存方法包括:
①低温冰箱保存方法(-20℃、-50℃或-85℃):
冷冻保存时使用螺旋口试管方便，棉塞试管外还可包裹塑料薄膜 。菌液在储存过程中用量不宜过多 ， 有的可加入保护剂 。另外 ， φ5mm的玻璃珠也可以用来吸附菌液 ， 然后将玻璃珠放入塑料容器中，再放入低温冰箱保存 。
②干冰保存法(-70℃左右):
即将菌种管插入干冰中，然后放入冰箱冷冻保存；
③液氮保存法(-196℃):
它是应用最广泛的微生物保存方法 。
操作步骤如下:
【微生物菌种保存方法汇总 菌种保藏方法】A.装瓶管:用尽可能厚的细菌悬浮在含有适当防冻剂的灭菌溶液中(保存霉菌不需要防冻剂)，然后将此溶液分装于安瓿中0.2 ~ 1 ml，或直接接种于装有分散剂的安瓿中 ， 或直接将菌丝体琼脂块悬浮于分散剂中 。
B.熔封封封瓶管:如果直接储存在气态液氮(-150℃ ~-170℃)中，则不需要熔封 。
C.检查安瓿管是否熔合良好:将熔合的安瓿管浸泡在4℃合适的颜料溶液中2 ~ 30分钟 ， 然后观察颜料是否进入安瓿 。
d、缓冷:将熔封好的封瓶管放入小罐中，然后用液氮以1℃/min左右的速度冷却至-25℃左右，或放入-20℃ ~-25℃的冰箱中缓慢冷却30 ~ 60 min 。
e、快速冷却:最后浸入液氮中，快速冷却至-196℃ 。
七、冷冻干燥保存方法
原理是先冷冻微生物，然后减压升华除去水分 。事实上，细菌去除大部分水分后，细胞的生理活动就会停止，从而达到长期维持生命状态的目的 。这种方法适用于大多数微生物种类(包括噬菌体和立克次体等)的保存 。).冷冻干燥过程中，应注意以下问题:
a、冻干前培养条件:首先检查菌种纯度 。一般来说，建议在营养丰富且易于富集的培养基上培养待保存的微生物 。细菌年龄应达到对数生长期 。如果是有孢子或孢子的微生物，最好在孢子和孢子形成后保存 。菌液的浓度要高 ， 如菌液应达到109 ~ 109~1010个/毫升 。
B.菌株编号的标记等 。:可以在安瓿外面做标记 ， 也可以把标签封在安瓿里面 。
c、安瓿的制备:将安瓿浸泡在2%HCl中过夜 ， 用自来水冲洗3次 ， 用蒸馏水刷洗，晾干，用棉塞塞住，贴上标签，干热灭菌或温灭菌后60℃烘干 。
D.添加保护剂:常用的保护剂有脱脂奶、12%蔗糖、普通肉汤加7.5%葡萄糖、血清加7.5%葡萄糖等 。甘油管保存法:在5mL菌种保存管中，将相同体积的菌悬液和40%甘油充分混合，然后放入-20℃的冰箱中保存 。
八、甘油管保存法
在5ml菌种储存管中 ， 将相同体积的菌悬液和40%甘油充分混合，储存在-20℃的冰箱中 。
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