菌种保存方法(微生物菌种保存方法概述)
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一、通行和保存方法
有些微生物经过冷冻或干燥处理后会很快死亡，所以在这种情况下，只能求助于继代培养和保存 。继代培养是定期转移菌种，培养后保存 。它是最基本的微生物保存方法，如酸奶等常用生产菌种的保存 。继代培养时，培养基的浓度不宜过高，营养成分不宜过于丰富 ， 尤其是碳水化合物的浓度要尽量降低 。培养温度通常略低于最适生长温度 。如果是产酸菌株，应在培养基中加入少量碳酸钙 。
一般大多数菌种的保存温度为5℃，厌氧菌、霍乱弧菌等微生物菌种和部分病原真菌可在37℃保存 ， 而蘑菇等大型食用菌可直接在室温下保存 。虽然传代保存的方法简单，但其缺点也很明显，如:
(1)应变管卫生棉条往往容易发霉；
②该菌株的遗传性状容易变异；
③反复传代后，菌株的致病性、形成生理活性物质的能力和形成孢子的能力下降 。
④需要定期补种，工作量大；
⑤杂菌污染的机会很多 。
二、液体石蜡覆盖保存法
与前一种方法相比 ， 这种方法可以更长时间地保存菌株，适用于霉菌、酵母菌、放线菌和好氧菌的保存 。这种方法可以通过限制氧气供应来防止干燥和削弱微生物代谢 。这种方法具有简单方便的优点，也适用于不适合冷冻干燥的微生物(如产孢能力低的丝状菌)的保存，而一些细菌如固氮菌、乳杆菌、明串珠菌、分枝杆菌、红螺菌和沙门氏菌，以及一些真菌如根霉、草青霉、毛霉和根霉不适合用这种方法保存 。
三、载体保存方法
即一种将微生物吸附在合适载体上进行干燥和保存的方法 。常用的方法包括以下几种，如:
①土壤保存法:主要用于能形成孢子或孢囊的微生物菌种的保存 。方法是在灭菌后的土壤中加入菌液，在室温下立即干燥或使细菌繁殖，然后干燥，然后冷藏或在室温下密封保存 。原则上，要保存的土壤应为肥沃的可耕地，土壤应风干、粉碎、过筛、灭菌 。微生物在土壤中繁殖后干燥保存的方法是:取适量土壤(5g)，放入带棉塞的试管中，加水或充分稀释的液体培养基(含水量为土壤最大持水量的60%)，然后高压灭菌 。接种大量待保存的微生物，培养至肉眼能确认菌丝，移入干燥器，短时间干燥或风干，密封，冷藏或室温保存 。
②砂保存方法:取干净的砂，过筛除去大砂粒，用磁铁吸出砂中的铁屑，然后用NaOH溶液、10%HCl溶液和水交替清洗数次，干燥后放入试管或安瓿中保持2 ~ 3 cm深，然后干热灭菌，加入1mL菌种培养液，充分混合后放入真空空干燥器中 。也可以将两部分水洗砂(用盐酸预处理)和一部分贫瘠过筛的黄土混合、灭菌后保存 。
③硅胶保存方法:用6 ~ 16目无色硅胶代替沙子，干热灭菌，然后加入菌液 。加入菌液时，由于硅胶的吸附热往往会升高温度，所以要尽量冷却 。
④磁珠保存法:将菌液浸入烧结磁珠(或多孔玻璃珠)中后进行干燥保存的方法 。用1/2管高硅胶(或无水硫酸钙)填充螺旋口腔试管，铺玻璃棉，然后放入10 ~ 20个磁珠，干热灭菌后，接种菌悬液，最后冷藏，室温保存或减压干燥，然后密封保存 。这种方法对酵母特别是根瘤菌非常有效 ， 可以保存长达两年半 。
⑤麸皮保存方法:在麸皮中加入60%的水，灭菌后接种培养，最后干燥保存 。
⑥纸(滤纸)的保存方法:将消毒后的纸浸入培养液或菌悬液中，常压或减压干燥，放入装有干燥剂的容器中保存 。
四.悬浮保存法
即使微生物悬浮在适当的溶液中 。常用的方法有:
①蒸馏水保存法:适用于霉菌、酵母菌和大多数放线菌，其菌体悬浮于蒸馏水中，可在室温下保存数年 。这个规律要注意避免水分蒸发 。
②糖液保存法:适用于酵母，如将其菌体悬浮于10%蔗糖溶液中，然后置于避寒避光处保存 ， 最长可保存10年 。此外，缓冲溶液或盐溶液也可用于储存 。
动词 （verb的缩写）宿主保存方法
也就是微生物入侵宿主后的保存方法 。用于目前无法在人工培养基上生长的微生物，如病毒、立克次体、螺旋体等 。它们必须在活的动物、昆虫和鸡胚中被感染和传代 。这种方法相当于一般微生物的传代培养和保存方法 。病毒和其他微生物也可以通过其他方法保存，如液氮保存和冷冻干燥保存 。
不及物动词冷冻保存方法
适用于抗冻性强的微生物 。这些微生物可以在细胞外冷冻而不会受到损伤，而对于大多数其他微生物来说，在细胞外或细胞内冷冻会对细胞造成损伤 。采用这种保存方法时，应注意以下几点:
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