锐客网

  1. 首页 > 睿知 > >

培养基的保存方法，培养基的保存和储藏( 二 )

经验知识睿知


烧糊的培养基营养物质被破坏 ， 并可产生有毒物质 ， 如发现焦化 ， 或未溶解均匀前培养基有溢出 ， 该培养基即不能使用 ， 应重新制备 。对于琼脂类培养基进行再融化时应使用沸水浴或流动蒸汽进行加热 ， 最多只能加热两次 ， 第二次再融化后仍未用完的培养基应弃去 。
4、灭菌
一般培养基采用湿热灭菌 ， 即高压蒸汽灭菌 ， 通常是121℃ 15 min ， 含糖或特殊培养基 ， 按照国家标准或生产商提供的说明灭菌 。已配制好的培养基必须立即灭菌 ， 避免微生物生长繁殖而消耗养分 ， 改变培养基的酸碱度 。
高温可破坏培养基的营养成分 ， 还会使琼脂的凝胶强度下降 ， 因此必须严格控制灭菌温度和时间 ， 并且不可重复灭菌 。高压蒸汽灭菌锅的压力表等要定期进行检定 ， 并定期采用生物指示菌法或化学变色纸片对灭菌效果进行验证 。
5、pH测定
微生物必须在适宜的pH范围内才能正常生长繁殖或体现其生物特性 。培养基配方要求的pH为灭菌或消毒后的pH值 ， 即培养基使用前的pH ， 并应在25℃温度下采用精密酸度计进行测量 ， 固体琼脂培养基应以特殊的胶体表面测量电极进行测量 。使用过程中 ， 如果需要调整培养基的pH ， 应用1mol/L Na0H或 lmol/LHCL调整 ， 注意不可反复调pH ， 否则会影响培养基的渗透压 。
6、配制好的培养基保存
灭菌以后培养基应该迅速冷却至所需温度 ， 避免长时间保存在灭菌锅内 ， 造成过度灭菌 ， 影响培养基的营养成分或选择性效果 。
所配制的培养基的量 ， 应该是在最长保存期限内正好使用完 。含染料的培养基应闭光保存；倒好的琼脂平板如果配制的当天未使用完 ， 应于冷藏保存 ， 如果保存时间超过2天 ， 应将其放入密封的塑料袋中保存；配好的肉汤类培养基如果保存时间超过2个星期 ， 应将其放在带有螺旋盖的试管或其它密闭的试管或容器中防止蒸发 。
四、培养基的性能测试
1、外观控制
制备好的培养基应有相应的颜色 ， 一般的培养基应澄清、无浑浊、无沉淀 。使用前应检查培养基的颜色是否发生变化 ， 是否蒸发/脱水 。
2、污染控制
从每批制备好的培养基中选取部分进行污染测试（空白试验） ， 确定无微生物生长方可使用 。
3、性能测试
⑴测试菌株选择：测试菌株是具有其代表种的稳定特性并能有效证明实验室特定培养基最佳性能的一套菌株 ， 应来自国际/国家标准菌种保藏中心ATCC标准菌株或其他有证书的菌株 。
⑵定量测试 *** ：改良Miles-Misra法 。测试菌株过夜培养物10倍递增稀释；测试平板和参照平板划分为4个区域并标记；从最高稀释度开始 ， 分别滴一滴稀释液于试验平板和对照平板标记好的区域；将稀释液涂满整个1/4区域 ， 37°C培养18小时；对易计数的区域计数 ， 按公式计算生长率（生长率=待测培养基平板上得到的菌落总数/参考培养基平板上获得的菌落总数） 。非选择性培养基上目标菌的生长率应不低于0.7 ， 该类培养基应易于目标菌生长；选择性培养基上目标菌的生长率应不低于0.1。
⑶半定量测试 *** ：改进的划线法接种法 。平板分ABCD四区 ， 共划16条线 ， 平行线大概相隔0.5cm ， 每条有菌落生长的划线记作1分 ， 每个仅一半的线有菌落生长记作0.5分 ， 没有菌落生长或生长量少于划线的一半记作0分 ， 分数加起来得到生长指数G 。目标菌在培养基上应呈现典型的生长 ， 而非目标菌的生长应部分或完全被抑制 ， 目标菌的生长指数G大于6时 ， 培养基可接受。

推荐阅读


上一篇：怎么养殖红虫？养殖红虫一亩地投资多少钱

下一篇：mysql新增字段为何会锁表？