先将锅内层的灭菌桶取出，加水至外锅内四分之三的位置，加水后放回内层的灭菌桶 。将需要消毒的器皿或其他物品放入消毒锅内 。物品分类摆放好后，关闭锅盖 ， 检查排气阀和安全阀的状态 。设定好杀菌锅的运行参数后，按下工作键，然后断电放气 。
杀菌锅里的东西不能太挤，不能超过锅的内容物 。试着在同一个锅里消毒相似的物品 。如果有不同种类的物品包装在一起，以难以灭菌的物品所需的温度和时间为准 。装物品时要上下左右错开，留有空隙，以便蒸汽容易渗透 。大的灭菌包要垂直放在上层，小的要放在下层 。
布料和金属物品同时消毒时，金属物品应包裹在下层 ， 使其基本上以同样的方式受热，并防止金属物品消毒时产生的冷凝水打湿包裹的布料 。盖，同时拧紧两个相对的螺栓 ， 使螺栓的松紧一致 。打开电源，检查参数设置是否正确，按下工作键 ， 达到规定的灭菌时间后 ， 关闭电源，打开气阀慢慢放气；只有当排气阀没有蒸汽排出时，才能打开盖子 。
【高压灭菌锅的正确使用方法】注意:在蒸汽排出之前 ， 不要打开高压锅 。如果灭菌后的培养基没有及时从锅内取出，需要在蒸汽排尽后打开锅盖，避免将培养基封闭在锅内过夜 。当压力表指针在0.05MPa以上时 ， 蒸汽不应释放过快，以免压力迅速下降，液体沸腾而从培养容器中溢出 。
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