【蛋白质工程知识点总结 蛋白质工程的一般流程】蛋白质工程的一般流程，包括原料选择、配方设计、生产工艺、质量控制、检测 *** 等 。本书可作为高等院校食品科学与工程专业本科生、研究生教材，也可供从事相关产品研发、生产的技术人员参考 。同时，本书还可作为食品企业管理人员的参考用书 。另外，本书还可作为食品行业从业人员的培训教材，以及对食品安全感兴趣的读者的参考用书 。
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蛋白质工程的一般流程预期的蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有的氨基酸序列→找到相应的脱氧核苷酸序列 。
根据中心法则逆推以确定目的基因的碱基序列：预期蛋白质功能→设计预期的蛋白质结构→推测应有氨基酸序列→找到对应的脱氧核苷酸序列（基因）；最终还是回到基因工程上来解决蛋白质的合成 。
蛋白质工程汇集了当代分子生物学等学科的一些前沿领域的最新成就，它把核酸与蛋白质结合、蛋白质空间结构与生物功能结合起来进行研究 。蛋白质工程将蛋白质与酶的研究推进到崭新的阶段，为蛋白质和酶在工业、农业和医药方面的应用开拓了诱人的前景 。蛋白质工程开创了按照人类意愿改造、创造符合人类需要的蛋白质的新时代 。蛋白质工程取得的进展向人们展示出了诱人的前景 。克隆细胞工程步骤？基因克隆的基本步骤流程如下：
一、目的DNA片段的获得：
DNA克隆的第一步是获得包含目的基因在内的一群DNA分子，这些DNA分子或来自于目的生物基因组DNA或来自目的细胞mRNA逆转录合成的双链 cDNA分子 。
由于基因组DNA较大，不利于克隆，因此有必要将其处理成适合克隆的DNA小片段，常用的 *** 有机械切割和核酸限制性内切酶消化 。若是基因序列已知而且比较小就可用人工化学直接合成 。如果基因的两端部分序列已知，根据已知序列设计引物，从基因组DNA 或cDNA中通过PCR技术可以获得目的基因 。
二、载体的选择：
基因克隆常用的载体有：质粒载体、噬菌体载体、柯斯质粒载体、单链DNA噬菌体载体、噬粒载体及酵母人工染色体等 。从总体上讲，根据载体的使用目的，载体可以分为克隆载体、表达载体、测序载体、穿梭载体等 。
三、体外重组：
体外重组即体外将目的片断和载体分子连接的过程 。大多数核酸限制性内切酶能够切割DNA分子形成有黏性末端，用同一种酶或同尾酶切割适当载体的多克隆位点便可获得相同的黏性末端，黏性末端彼此退火，通过T4 DNA连接酶的作用便可形成重组体，此为黏末端连接 。
当目的DNA片断为平端，可以直接与带有平端载体相连，此为平末端连接，但连接效率比黏端相连差些 。有时为了不同的克隆目的，如将平端DNA分子插入到带有黏末端的表达载体实现表达时，则要将平端DNA分子通过一些修饰；
如同聚物加尾，加衔接物或人工接头，PCR法引入酶切位点等，可以获得相应的黏末端，然后进行连接，此为修饰黏末端连接 。
四、导入受体细胞：
载体DNA分子上具有能被原核宿主细胞识别的复制起始位点，因此可以在原核细胞如大肠杆菌中复制，重组载体中的目的基因随同载体一起被扩增，最终获得大量同一的重组DNA分子 。
五、重组子的筛选：
从不同的重组DNA分子获得的转化子中鉴定出含有目的基因的转化子即阳性克隆的过程就是筛选 。发展起来的成熟筛选 *** 如下：
（1）插入失活法：外源DNA片段插入到位于筛选标记基因（抗生素基因或β-半乳糖苷酶基因）的多克隆位点后，会造成标记基因失活，表现出转化子相应的抗生素抗性消失或转化子颜色改变，通过这些可以初步鉴定出转化子是重组子或非重组子 。常用的是β-半乳糖苷酶显色法即蓝白筛选法（白色菌落是重组质粒） 。
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