（2）PCR筛选和限制酶酶切法：提取转化子中的重组DNA分子作模板，根据目的基因已知的两端序列设计特异引物，通过PCR技术筛选阳性克隆 。PCR法筛选出的阳性克隆，用限制性内切酶酶切法进一步鉴定插入片段的大小 。
（3）核酸分子杂交法：制备目的基因特异的核酸探针，通过核酸分子杂交法从众多的转化子中筛选目的克隆 。目的基因特异的核酸探针可以是已获得的部分目的基因片段,或目的基因表达蛋白的部分序列反推得到的一群寡聚核苷酸,或其它物种的同源基因 。
（4）免疫学筛选法：获得目的基因表达的蛋白抗体，就可以采用免疫学筛选法获得目的基因克隆 。这些抗体即可是从生物本身纯化出目的基因表达蛋白抗体，也可从目的基因部分ORF片段克隆在表达载体中获得表达蛋白的抗体 。
扩展资料：
基因克隆的注意事项：
1、平端连接：DNA连接酶可催化相同和不同限制性核酸内切酶切割的平端之间的连接 。原则上讲，限制酶切割DNA后产生的平端也属配伍末端，可彼此相互连接；若产生的粘性末端经特殊酶处理，使单链突出处被补齐或削平，变为平端，也可实行平端连接 。
2、加尾连接：同聚物加尾连接是利用同聚物序列，如多聚A与多聚T之间的退火作用完成连接 。在末端转移酶作用下，在DNA片段端制造出粘性末端，而后进行粘性末端连接 。这是一种人工提高连接效率的 ***，也属于粘性末端连接的一种特殊形式 。
3、人工接头连接：对平端DNA片段或载体DNA，可在连接前将磷酸化的接头(linker)或适当分子连到平端，使产生新的限制性内切酶位点 。再用识别新位点的限制性内切酶切除接头的远端，产生粘性末端 。
1.取对数生长期的各组细胞，分别用0.25%胰蛋白酶消化并吹打成单个细胞，并把细胞悬浮在10%胎牛血清的DMEM培养液中备用 。
2.将细胞悬液作梯度倍数稀释，每组细胞分别以每皿50、100、200个细胞的梯度密度分别接种含10mL 37℃预温培养液的皿中，并轻轻转动，使细胞分散均匀 。置37℃ 5% CO2及饱和湿度的细胞培养箱中培养2～3周 。
3.经常观察，当培养皿中出现肉眼可见的克隆时，终止培养 。弃去上清液，用PBS小心浸洗2次 。加4%多聚甲醛固定细胞5mL固定15分钟 。然后去固定液，加适量GIMSA应用染色液染10～30分钟，然后用流水缓慢洗去染色液，空气干燥 。
4.将平皿倒置并叠加一张带网格的透明胶片，用肉眼直接计数克隆，或在显微镜（低倍镜）计数大于10个细胞的克隆数 。最后计算克隆形成率 。
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