革兰氏染色的注意事项


革兰氏染色的注意事项

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注意事项
1、选用活跃生长期菌种染色,老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性 。
2、涂片不宜过厚 , 以免脱色不完全造成假阳性 。
3、脱色是革兰氏染色是否成功的关键 , 脱色不够造成假阳性 , 脱色过度造成假阴性 。
实验流程
1、取载玻片用纱布擦干 , 载玻片的一面用马克笔画一个小圈(用来大致确定菌液滴的位置) 。涂菌的部位在火焰上烤一下,除去油脂 。
2、涂片
液体培养基:左手持菌液试管,在酒精灯火焰附近5厘米左右打开管盖;右手持接种环在火焰中烧灼灭菌,等冷却后从试管中沾取菌液一环 , 在洁净无脂的载玻片上涂直径2毫米左右的涂膜,最后将接种环在火焰上烧灼灭菌 。
固体培养基:先在载玻片上滴一滴无菌水,再用接种环取少量菌体,涂在载玻片上 , 使其薄而均匀 。
【革兰氏染色的注意事项】3、晾干:让涂片在空气中自然干燥 。
4、固定:让菌膜朝上,通过火焰2-3次固定(以不烫手为宜) 。
5、染色:将固定过的涂片放报纸上,滴加草酸铵结晶紫液,染1分钟 。
6、水洗:用水缓慢冲洗涂片上的染色液 , 用吸水纸吸干 。简单染色结束可观察细胞形态 。
7、媒染:滴加1滴碘液,染1分钟,水洗 。
8、脱色:吸去残留水 , 连续滴加95%乙醇脱色20-30秒至流出液无紫色,立即水洗 。
9、复染:滴加蕃红复染3-5分钟,水洗 。至此 , 革兰氏染色结束 。

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