co ip原理 co-ip如何做好，co ip技术 _睿知

IP 和 CoIP有什么区别？
简单来说，IP就是用抗体免疫沉淀你想要的蛋白质，然后进行检测。比如细胞内蛋白A的量不同，或者有不同的翻译后修饰。这可以通过IP用蛋白A的抗体prorein A珠，把A从细胞上拉下来，然后用特异性抗体(如磷酸化和泛素化抗体)检测A的变化来实现，co-ip的原理也是一样的，因为它检测的是与A相互作用的蛋白，也就是说，A被A的抗体拉下来后，用与A相互作用的蛋白B的抗体检测，证明A与B的相互作用.扩展资料：免疫沉淀实验步骤：(1)收获细胞，加入适量IP裂解缓冲液(含蛋白酶抑制剂)，冰上或4裂解30 min，12,000g离心30min，取上清液； (2)取少量裂解液进行Western blot分析，在剩余的裂解液中加入1g相应抗体和10-50l蛋白A/g-珠，缓慢摇匀，4孵育过夜；(3)在免疫沉淀反应后，在4下以3，000 g的速度离心5分钟，并将蛋白A/G珠离心至试管底部；小心吸取上清液，用1ml裂解缓冲液洗涤蛋白A/G珠3-4次；最后加入15l 2SDS上样缓冲液，沸水中煮沸10分钟；(4)SDS-PAGE、蛋白质印迹或质谱法。参考：免疫共沉淀百度百科词条
请教CO-IP的经验
TritonX-100和NP40都可以，差别不大。只是不知道你说的没有好结果。一般需要预清理和4度吸积。洗的时候注意离子强度的选择。因为我们正处于探索条件的阶段，所以我们使用T+p53作为阳性对照。将T+p53质粒转移到细胞中，48小时后收获，加入不同NaCl浓度的裂解缓冲液进行裂解。遇到的困难：1 。提取的蛋白质浓度太低。2.总蛋白直接SDS—PAGE电泳后发现条带边界呈锯齿状，减少上样缓冲液和非减少上样缓冲液的蛋白条带数无差异，上样后溴芬电泳特别难看。3.使用提取的蛋白CO-IP，参考罗氏公司的操作手册，因为我们用的protei A-琼脂糖是罗氏的；洗完后做WB，发现目标带如果有也很弱，实验很不稳定。重复实验的结果是不同的。后来60mm平板换成100mm平板培养细胞，细胞量增加。
pull-down 和co-IP的区别是什么
下拉和co-IP的区别如下：区别一：Co-IP作用：Co-IP，证明两种蛋白质在细胞内相互作用，但这种作用在形成复合物后，既可以是直接作用，也可以是间接作用。区别二：下拉效应：下拉。蛋白质经过胞外纯化后，证明两种蛋白质之间存在相互作用，而且一定是直接的相互作用。差异3: Co-IP，体内效应：Co-IP，体内。可以证明两种蛋白质至少会在体内形成复合物，但不能确定是否直接相互作用，只好求助于下拉。两者缺一不可。区别四：Co-IP和下拉的结合：下拉一般只使用一种带有GSTtag的重组蛋白与目的蛋白孵育，最后用GST结合的珠子下拉相互作用复合物。Co-IP一般是将某种蛋白质的抗体与细胞裂解液中相应的蛋白质反应，抗原抗体复合物被蛋白质A/G下拉，最终在下拉的复合物中检测出目的蛋白质的实验。扩展资料：Co-IP和GSTPull-down本质上都是亲和层析。假设我们要研究M蛋白能否与N蛋白相互作用。Co-IP技术的原理是利用一个偶联了A/G蛋白的小磁珠，可以与抗体的恒定区结合。在Co-IP的结果图中，我们经常可以看到IP: M的字样，IP: M代表系统中加入了M蛋白的抗体。然后一个一个的拉，A/G蛋白-M蛋白的抗体-M蛋白就会结合在小磁珠上。如果M蛋白与N蛋白相互作用，N蛋白也会在小磁珠上被检测到。但如果M蛋白和N蛋白之间没有相互作用，N蛋白就不会出现在小磁珠中，最终检测不到N蛋白。至于GST下拉，如果要研究M蛋白能否与N蛋白相互作用，这种方法需要构建M蛋白与谷胱甘肽S-转移酶GST的融合蛋白，然后将其加载到谷胱甘肽亲和层析柱上，使M蛋白与层析柱结合。然后将N蛋白通过柱子。如果层析柱最终结合了N蛋白，说明M蛋白可以和N蛋白相互作用。

文章插图
求教CO-IP蛋白裂解液配方
本品为传统细胞组织快速裂解液。用本产品裂解获得的蛋白质样品可用于常规Western、IP等。主要成分是50mM Tris (pH7.4)、150mM NaCl、1% NP-40和0.1% SDS 。使用通过裂解该产品获得的蛋白质样品，可以通过BCA蛋白质浓度测定试剂盒测定蛋白质浓度。
请问有哪位仁兄可以解释一下CO-IP里input是什么意思，该怎么做呀
输入用于比较，看你的蛋白是否表达。