斑块|一文掌握小鼠动脉粥样硬化斑块定量评估( 三 )
除主动脉根部外 ， 头臂动脉、颈动脉等也可行冰冻切片和染色 ， 具体方法与
主动脉类似 ， 需要尽可能保持切片方向与血管走行方向垂直 ， 其应用相对较少 ， 此处不再赘述 。
五、动脉粥样硬化斑块切片染色与定量评价
对动脉粥样硬化病变程度的评估不应仅仅关注于斑块大小 ， 对斑块结构的分析同样关键 。在人类中 ， 容易发生破裂的「易损斑块」往往具有大的坏死核和薄纤维帽 ， 斑块中平滑肌细胞和胶原纤维含量较少 ， 而炎症反应较重 。尽管在小鼠模型中斑块破裂现象极为少见 ， 对于斑块中胶原、平滑肌、巨噬细胞、T 细胞以及粘附因子如 VCAM-1、ICAM-1、炎症因子如 IFN-γ 等组分的分析对于评价斑块的稳定性仍具有一定意义 ， 可以通过对主动脉根部多张冰冻切片进行不同染色来检测这些组分 。主动脉根部粥样斑块常用染色方法如下 。
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图 5-1 小鼠主动脉根部油红和Masson染色
【斑块|一文掌握小鼠动脉粥样硬化斑块定量评估】1. 油红 O 染色
油红 O（Oil Red O）是一种脂溶性偶氮染料 ， 是很强的脂溶剂和染脂剂 ， 能特异性地使组织和细胞内中性甘油三脂、脂质以及脂蛋白等染色 。动脉粥样硬化斑块中由于富含脂质 ， 能够被油红 O 染为红色 ， 因此常常用于斑块大小和脂质含量的评价 。
染色完成后 ， 光镜下观察拍照 ， 图像采用 Image-Pro Plus 或 ImageJ 等软件分别计算管腔面积和斑块面积 ， 将斑块总面积除以管腔面积即为斑块的相对大小 。另外 ， 也可根据拍照时的标尺计算斑块的绝对面积 ， 单位通常为 mm2 ；或者采用软件计算图像中红色部分面积 ， 除以斑块总面积 ， 即为斑块中脂质含量百分比（图 5-1A） 。左右冠状动脉通常从距离主动脉窦 250μm 左右的部位发出 ， 该位置同时也是斑块最严重的部位 ， 因此 ， 该处切片常常作为代表图像用于结果展示 。
2. Masson 三色染色
Masson 三色染色是经典的评价胶原纤维的染色技术 ， 能够区分胶原纤维和肌纤维 ， 染色后肌纤维呈红色 ， 胶原纤维呈蓝色 ， 可用于评估粥样斑块中的胶原含量 。
染色完成后 ， 光镜下观察拍照 ， 采用 Image-Pro Plus 或 ImageJ 等软件计算图像中深蓝色部分面积 ， 除以斑块总面积 ， 即为斑块中胶原含量百分比（图 5-1B） 。通常认为 ， 斑块中胶原相对含量越高 ， 提示斑块越稳定 。
3. 天狼星红染色
同 Masson 三色染色目的相同 ， 天狼星红染色也用于对胶原含量的评价 。在普通光学显微镜下 ， 心脏血管等组织中的胶原纤维被染成红色 ， 肌纤维被染成黄色 。在偏振光显微镜下 ， 能够进一步区分各型胶原 。在偏振光显微镜下 ， Ⅰ 型胶原纤维呈红色或黄色 ， 排列紧密 ， 具有强双折光性；Ⅱ 型胶原纤维色彩多样 ， 疏松网状 ， 弱双折光性；Ⅲ 型胶原纤维呈绿色 ， 细纤维 ， 弱双折光性；Ⅳ 型胶原纤维为淡黄色 ， 弱双折光性 。
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图 5-2 小鼠主动脉根部天狼星红染色
染色完成后 ， 普通显微镜（图 5-2A）或偏振光显微镜（图 5-2B）下观察拍照 ， 采用 Image-Pro Plus 或 ImageJ 等软件计算图像中胶原面积 ， 除以斑块总面积 ， 即为斑块中胶原含量百分比 。通常认为 ， 斑块中胶原相对含量越高 ， 提示斑块越稳定 。
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