细胞|踩坑多年后的吐血经验，终于能养好细胞了
对于养细胞的人来说
可谓是谈「污」色变
每次养细胞总让人有种神经错乱
一进细胞房就想让空气都静止下来
打开培养皿的一瞬间
连呼吸都变得如此多余
只要有任何异样
无论是支原体还是杂菌
污染！污染！污染！
犹如细胞实验的魔咒
让一切都无限重复……
那么 ， 如何将失败率降到最低 ， 让我们摆脱玄学的漩涡呢？
今天大博士专门为大家盘点了细胞培养进阶超实用干货 ， 基本的培养和常见问题处理都面面俱到 ， 一篇在手 ， 以后你就能与细胞愉快的玩耍了！
BOSTER
一、细胞污染
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#1
如何判断细胞污染了？
现象 1： 细胞培养液变浑浊了 ， 经常见到是米汤样 ， 黄色液体 ， 一般认为细菌污染 。
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图 3. 黑胶虫
现象 3：培养基清亮 ， 但是能看到飘在培养液带有毛毛的白色的菌状物质 ， 有可能就是真菌感染 。
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图 4. 真菌污染
解决办法：细胞出现污染就直接丢弃 ， 还得把培养箱用酒精棉球擦干净 ， 并用紫外照射半小时 ， 防止再次污染 。同时建议细胞培养时 ， 在培养基中加入青霉素和链霉素(尤其是初学者)
#2
细胞培养过程中 ， 细胞周围包括细胞上有很多小黑点 ， 怎么办?
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图 5. 不动的小黑点 ， 细胞碎片或支原体污染
【细胞|踩坑多年后的吐血经验，终于能养好细胞了】解决办法：细胞出现黑点一般判定为细胞碎片或杂质 ， 可参照以下进行：
如果是悬浮细胞：收集细胞上清慢速离心（500~600 rpm/min ， 5~6 min）并更换新的培养瓶 。
如果是贴壁细胞：将细胞用 PBS 洗 2~3 遍 ， 洗的时候 ， 轻轻拍打培养瓶 ， 让贴壁不牢的碎片和颗粒脱落 ， 再弃去 PBS ， 消化时先加低浓度的胰酶如 0.05% 胰酶消化 1 min 左右 ， 让细胞间隙中的颗粒和碎片脱落下来 ， 去掉低浓度胰酶 ， 然后正常消化细胞 ， 将收集的细胞悬液慢速离心（500~600 rpm/min ， 5~6 min）并更换新的培养瓶 ， 并可以尝试适当增加血清浓度进行培养 。
如果怀疑黑点是支原体污染 ， 可进行支原体检测 ， 检测阳性请及时将细胞处理后丢弃 。比较珍贵的细胞 ， 可以尝试使用支原体清除剂（如泰乐菌素等）去除 ， 并与其他细胞分开培养 。
如何预防细胞培养中黑点的产生?
解决办法：掌握细胞传代的最佳时机 ， 不要细胞长老了再传代；掌握好消化时间 ， 防止消化过度产生细胞碎片；减少血清等试剂的冻融次数；将培养液的 PH 调到最佳；严格控制水质和器皿的清洁 。
#3
细胞培养过程中 ， 发现贴壁细胞表面沾了很多死细胞 ， 传代过程中一直存在怎么破？
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图 6. 细胞表面一些死的细胞团
解决办法：有一招屡试不爽 ， 那就是用 PBS 洗两遍之后 ， 加胰酶进去 ， 晃一晃 ， 迅速将胰酶倒出 ， 再用 PBS 洗一下 ， 再加胰酶正常消化 。死细胞由于粘附能力很弱 ， 第一次加胰酶进去以后会掉下来 ， 第二次加胰酶下来的细胞才是活性比较强的细胞 。整完一次之后 ， 再次传代方法同上 ， 一般 2～3 次之后 ， 细胞就完好如初了 。
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